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        產品詳情
        • 產品名稱:大鼠特價elisa試劑盒

        • 產品型號:PR107371
        • 產品廠商:派瑞曼
        • 產品文檔:
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        簡單介紹:
        大鼠特價elisa試劑盒售后:我公司具有上等的技術團隊,產品一旦售出,實驗過程中遇到困難可提供在線技術咨詢。使您使用大鼠特價elisa試劑盒時沒有任何的后顧之憂。
        詳情介紹:

        檢測程序:
        1.  加樣:每孔各加入標準品或待測樣品 100ul ,將反應板充分混勻后置 37 ℃ 120 分鐘。
        2.  洗板:用洗滌液將反應板充分洗滌 4-6 次,向濾紙上印干。
        3.  每孔中加入抗體工作液10 0ul 。將反應板充分混勻后置 37 ℃ 6 0 分鐘。
        4.  洗板:同前。
        5.  每孔加酶標抗體工作液100ul 。將反應板置 37 ℃ 3 0 分鐘。
        6.  洗板:同前。
        7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗處反應15 分鐘。
        8.  每孔加入100ul 終止液混勻。
        9.  30分鐘內用酶標儀在 45 0 nm 處測 吸光值。

        下列是公司產品elISA試劑盒的詳細說明書:
        中文名稱:大鼠特價elisa試劑盒
        英文簡稱:RatELISA Kit
        產品貨號:PR107371
        規格:96T/48T
        適用范圍:僅供科研使用
        保存及有效期:2-8℃保存,6個月,-20℃一年

        試劑和樣本的控制方法:
        一、試劑
        1.試劑的選擇:國家明確要求要采用批批檢定的形式對ELISA試劑嚴格把關,我司嚴格按照國家標準進行生產,已獲得國家承認的“三證”,每一個產品都有對應的生產批號,只要客戶提前下單,我們就能為您提供新批次的產品,不必擔心會有過期的試劑。我司的試劑,值得您選擇。
        2.試劑的準備:先將試劑盒先從冰箱中拿出來,在室溫下放置20-30 min后,再進行測定,使試劑盒在使用前與室溫平衡,這樣做的目的能使反應微孔內的溫度較快地達到所需的溫度,以滿足后面的測定需求。
        二、樣本
        1.內源性干擾因素:包括類風濕因子、補體、高濃度的非特異球蛋白、異嗜性抗體、某些自身抗體等;
        類風濕因子的控制方法:
        ①用F(ab)2替代完整的IgG;
        ②標本用聯有熱變性IgG的固相吸附劑處理;
        ③檢測抗原時,可用2-巰基乙醇加入到標本稀釋液中使RF降解。

        使用方法:
        測定法的靈敏度來自作為報告的酶。眾所周知,酶是一種有機催化劑,很少量的酶即可誘導大量的催化反應,產生可供觀察的顯色反應現象。因此該體系常被稱為酶放大體系。
        1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   24μg/ml    5號標準品    150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
         12μg/ml    4號標準品    150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
         6μg/ml     3號標準品    150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
         3μg/ml     2號標準品    150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
         1.5μg/ml   1號標準品    150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液
        2. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。|
        3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   
        4. 配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
        5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
        6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。
        7. 溫育:操作同3。
        8. 洗滌:操作同5。
        9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
        10. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
        11. 測定:以空白空調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
        ELISA 試驗時,注意事項如下: 
             1. 正式試驗時,應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗結果的準確性。有時本底較高,說明有非特異性反應,可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。 
             2. 在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括: 
             (1) 固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。 
             (2) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質包被的zui適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值zui大而蛋白量zui少的濃度。對于多數蛋白質來說通常為1~10μg/ml。 
             (3) 酶標記抗體工作濃度的選擇:首先用直接ELISA法進行初步效價的滴定(見酶標記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統里準確地滴定其工作濃度。 
             (4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要**價廉、**、有明顯地顯色反應,而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液必須新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入 。

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