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        細胞凍存具體過程

        日期:2023-01-22 15:02
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        摘要: 細胞凍存具體過程: 1、預先配制凍存液: 凍存液比例多種,根據細胞的特性進行調整凍存液的比例: 5%—10%DMSO + 20%—90%血清 + 0%—70%基礎培養液; 2、取對數生長期的細胞,去除舊培養液,用PBS清洗1-2次;去掉培養瓶里的殘余血清; 3、加入適量胰酶(濃度一般為0.25%),使胰酶覆蓋整個瓶,放入培養箱消化; 4、細胞消化0.5-2min(具體時間根據鏡下形態判斷),顯微鏡下觀察細胞,細胞胞質回縮,細胞間不再連接成片,此時加入完全培養...

        細胞凍存具體過程:

        1、預先配制凍存液:

        凍存液比例多種,根據細胞的特性進行調整凍存液的比例:

        5%—10%DMSO + 20%—90%血清 + 0%—70%基礎培養液;

        2、取對數生長期的細胞,去除舊培養液,用PBS清洗1-2次;去掉培養瓶里的殘余血清;

        3、加入適量胰酶(濃度一般為0.25%),使胰酶覆蓋整個瓶,放入培養箱消化;

        4、細胞消化0.5-2min(具體時間根據鏡下形態判斷),顯微鏡下觀察細胞,細胞胞質回縮,細胞間不再連接成片,此時加入完全培養基終止消化;

        5、用巴氏吸管輕輕吹打細胞,形成細胞懸液,將細胞懸液1000r/min左右條件下離心3-5min;

        6、棄上清,加入適量預先配制好的凍存液,巴氏吸管輕輕吹打使細胞均勻,計數,調節凍存液中的細胞密度為5×106/ml~1×107/ml;

        7、將細胞分裝入凍存管中,每管1-1.5ml;

        8、凍存管標記細胞名稱,凍存時間,操作者及細胞代數信息。

        對于懸浮細胞凍存,則直接收集離心細胞,除去胰酶消化的步驟,其他步驟相同。

        注意事項:

        1、需凍存保種的細胞應在生長良好且存活率高,其密度約為80-90%的狀態。細胞凍存前應保證細胞的活力好,無污染。

        2、在細胞凍存過程中,所結的冰晶對細胞傷害較大,所以過程一定要慢。凍存或者復蘇用新配制的培養液。

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